Определение группы крови по стандартным сывороткам: с помощью, резус-фактора, методом

Определение групп крови стандартными гемагглютинирующими сыворотками

Министерство здравоохранения РФ

ГОУ ВПО Тюменская государственная

Медицинская академия

Кафедра общей хирургии

Методические рекомендации

Переливание крови

Тюмень – 2009 г.

Методические рекомендации для студентов 3 курса лечебного факультета.

Составители: профессор Цирятьева С.Б., доцент Горбачев В.Н., к.м.н. Чернов И.А., профессор Кечеруков А.И., доцент Алиев Ф.Ш., ассистент Барадулин А.А., ассистент Комарова Л.Н.

Утверждено ЦКМС ТюмГМА в качестве учебно-методического пособия (протокол № 3 от 16.12.09)

Изложены понятия о группах крови и резус – факторе. Детально описаны методы определения группы крови и резус фактора, способы гемотрансфузии и правила переливания крови.

Переливание крови

Обратите внимание

История переливания крови насчитывает более 3-х веков. предпринимаемые с 17 века попытки переливания крови человеку чаще всего кончались неудачей. Благоприятный исход в этот период мог быть чисто случайным, так как вопросы взаимодействия крови донора и реципиента в то время были не изучены.

В 1901 году австриец Карл Ландштейнер установил, что в зависимости от наличия в эритроцитах изоантигенов, а в плазме изоантител все человечество можно разделить на 3 группы. В 1907 году чех Я.

Янский дополнил данные Ландштейнера, выделив 4-ю группу, и создал классификацию групп крови, принятую с 1921 года как международную.

Цель занятия: изучить способы определения группы крови и резус – фактора, способы и правила переливания крови.

Студент должен знать: понятия о группах крови по системе АВО и резус – факторе, способы определения групп крови и резус – фактора.

Студент должен уметь: определить группу крови и резус фактор цоликлонами и стандартными сыворотками, дать макроскопическую оценку годности крови к переливанию, провести пробы на совместимость по системе АВО, резус – фактору, биологическую пробу, собрать систему для переливания крови.

План изучения темы:

1. Понятия о группах крови и резус факторе

2. Способы определения групп крови и резус – фактора

3. Показания и противопоказания к переливанию крови

4. Макроскопическая оценка годности крови к переливанию

5. Способы переливания крови и ее компонентов

6. Оформление протокола гемотрансфузии

7. Посттрансфузионные реакции и осложнения, их профилактика и лечение

Г Р У П П Ы К Р О В И.

Для возникновения гемолитических посттрансфузионных реакций и несовместимости матери и плода имеет значение, прежде всего антигенная структура эритроцита. АНТИГЕНЫ – вещества белковой природы, способные вызывать в организме образование антител и вступать с ними в реакцию.

В организме человека кроме иммунных антител, которые вырабатываются в ответ на попадание в него антигена, есть естественные антитела, существующие с момента рождения и обусловленные генетическими признаками, наследуемыми от родителей.

Важно

Примером естественных антител являются групповые АГГЛЮТИНИНЫ a и b. Они специфичны и вступают в реакцию с соответствующими антигенами – АГГЛЮТИНОГЕНАМИ А и В. Температурный оптимум реакции +150 – +250 С.

Все человечество в зависимости от содержания в эритроцитах антигенов (агглютиногенов) А и В делится на 4 группы:

1 группа – не содержит антигенов;

2 группа – содержит агглютиноген А;

3 группа – содержит агглютиноген В;

4 группа – содержит агглютиногены А и В.

В крови этих групп в строгой зависимости от наличия или отсутствия групповых антигенов А и В, которые получили название агглютиногенов, содержатся групповые антитела, которые иначе называются агглютининами (изоагглютининами, групповыми агглютининами).

Система крови остается стабильной при отсутствии в ней одноименных агглютининов и агглютиногенов (антител и антигенов). В этом случае не происходит их взаимодействия, проявляющегося агглютинацией (склеиванием) и гемолизом (разрушением) эритроцитов.

Таким образом, по серологическим свойствам эритроцитов и плазмы выделяют 4 группы крови.

Процентное соотношение лиц с различными группами крови в различных местах земного шара не одинаково. В странах СНГ оно приблизительно таково:

О(I гр.) А(II гр.) В(III гр.) АВ(IV гр.).
34% 37% 21% 8%

Р Е З У С – Ф А К Т О Р.

В 1937 году Ландштейнер и Винер открыли резус-фактор Rh – фактор). В ходе опытов по иммунизации кролика эритроцитами обезьяны макака-резус (Makakus rhesus) была получена сыворотка, агглютинировавшая 85% образцов эритроцитов человека – независимо от групповой принадлежности.

Так было установлено наличие в эритроцитах человека вещества антигенной природы, аналогичной таковому у макаки-резус. Оно получило название резус-фактор. Люди, в крови которых этот фактор есть, стали обозначаться как “резус-положительные”, те, у кого он не определялся – “резус отрицательные”.

Резус-фактор содержится в крови около 85% людей и в отличие от агглютиногенов (антигенов) А и В не имеет, как правило, естественных антител. Антитела против резус-фактора (анти-резус) возникают только вследствие сенсибилизации резус-отрицательного (не имеющего резус-фактора) человека эритроцитами, содержащими резус-фактор.

Совет

Антитела могут также появиться в крови резус-отрицательной беременной женщины в ответ на резус-положительный плод. Резус-несовместимость (резус-конфликт) возникает в случае повторного контакта сенсибилизированного человека с резус-фактором (переливание крови, беременность).

В крови существует множество других антигенов. Они обозначены как системы МN, Келл, Даффи, Льюис, Лютеран и др. Выраженные посттрансфузионные осложнения и гемолитическая болезнь вызываются ими крайне редко. В настоящее время антигены выявлены в лейкоцитах, тромбоцитах, других белковых структурах общей численностью около 300 видов.

Перед каждой гемотрансфузией обязательны следующие исследования крови и пробы:

1. Определение группы крови – системы АВО у донора и реципиента.

2. Определение резус – принадлежности крови донора и реципиента.

3. Определение групповой совместимости крови донора и реципиента.

4. Определение резус – совместимости крови донора и реципиента.

5. Проведение биологической пробы.

Только правильное и полное выполнение этих проб и реакций гарантирует от переливания несовместимой крови, от развития гемотрансфузионных осложнений.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВО.

Групповая принадлежность крови определяется реакцией агглютинации при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток или цоликлонов.

Определение групп крови стандартными гемагглютинирующими сыворотками.

Стандартные гемагглютинирующие сыворотки системы (из крови доноров или ретроплацентарной крови) поступают в ампулах по 2 мл. Перед определением следует убедиться в наличии на этикетке ампулы обозначения группы сыворотки, срока годности, номера серии и наименования учреждения его изготовившего.

Срок годности сыворотки- 4 месяца со дня изготовления. Если в ампулах с сыворотками обнаруживаются хлопья или взвесь, то они для использования не пригодны, несмотря на не истекший срок. Для удобства пользования сыворотка окрашивается в различные цвета.

Сыворотка 1-й группы не окрашивается, 2-й группы – окрашивается в голубой цвет, 3-ей группы в розовый, 4-ой группы в желтый. Аналогичного цвета полосами маркируются ампулы. Ампулы хранятся в холодильнике при температуре +4о-+6о С или при комнатной температуре.

Сыворотками лучше пользоваться в день вскрытия ампул, но допускается хранение открытых ампул 3-4 дня в холодильнике при условии, если горлышко заклеивается пластилином, лейкопластырем, закрывается ваткой.

Обратите внимание

Определение группы крови проводится при температуре +150 – +250С на маркированной плоскости (тарелке) белого цвета, где записывается фамилия лица, у которого определяется кровь, согласно международной классификации маркируются точки нанесения сыворотки. Используются стандартные сыворотки двух серий групп О(I), А(II), В(III).

После их нанесения получается шесть капель, расположенных в два ряда в следующем порядке: О(I), А(II), В(III). Каждая сыворотка наносится своей пипеткой. Исследуемая кровь углами предметного стекла или стеклянными палочками вносится в сыворотку в количестве в десять раз меньшем и тщательно перемешивается.

Можно перемешивать кровь с сывороткой одним и тем же углом предметного стекла (или стеклянной палочкой), но в этом случае после каждого перемешивания необходимо промывать стекло в воде и насухо вытирать. За ходом реакции, в общей сложности, наблюдают не менее 5-ти минут, периодически покачивая тарелку.

В лунки, где к третьей минуте наблюдения произошла агглютинация, вносят по капле физ.раствора и наблюдают еще две минуты. Добавление физиологического раствора не разрушает истинной агглютинации и позволяет отдифференцировать ее от псевдоагглютинации, обусловленной самопроизвольным склеиванием эритроцитов в монетные столбики. Результат оценивается по наличию агглютинации.

Эритроциты группы О(I) не содержат антигенов и в реакцию агглютинации не вступают. Эритроциты группы А(II) не дают агглютинации только с сывороткой своей группы, эритроциты В(III) также не дают агглютинации только с сывороткой своей группы.

Если во всех сыворотках произошла агглютинация, то для исключения неспецифической панагглютинации и подтверждения, что это эритроциты IV группы крови, следует дополнительно исследовать их стандартной сывороткой группы АВ (IV). Для этого используется одна сыворотка, исследование проводится с соблюдением всех выше указанных условий.

Сыворотка группы АВ(IV) не содержит никаких антител, а поэтому не должна давать агглютинации. (таблица 1). При определении групп крови следует обратить особое внимание на сроки чтения результата – они не должны быть менее 5-ти минут. Так разновидность второй группы крови А(II) дает агглютинации, как правило, раньше чем обычно – к исходу 3-4-ой минуты.

Таблица 1.

Результат реакции с изогемагглютинирующими сыворотками группы Исследуемая кровь принадлежит к группе
0аb(I)   Аb(II) Ва(III) АВ(IV)
0(I)
+ + А(II)
+ + B(III)
+ + + AB(IV)

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток. Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – её отсутствие.

Рекомендуемые страницы:

Воспользуйтесь поиском по сайту:

Источник: https://megalektsii.ru/s4199t2.html

Определение резус-принадлежности крови

Определение резус-принадлежности крови С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОК

Понятие резус-фактор — слишком общее (и устаревшее). Система резус антигенов многообразна. Современные методы исследования позволяют делать тесты индивидуально по резусу D, С, с, Е, е. Кроме этого, необходимо выявлять случаи со слабым D-антигеном или вариабильным D-антигеном. Вся эта информация тоже крайне важна при подборе донора в случае необходимости.

Ход работы. Определение резус-принадлежности крови проводится с помощью стандартной универсальной сыворотки «антирезус» для всех групп крови. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл) исследуемой  крови   или  эритроцитов   и  добавляют   1—2  капли  стандартного универсального реагента «антирезус» той же группы крови.

Читайте также:  Массаж при всд (вегетососудистой дистонии): самомассаж, точечный, классический, можно ли делать

Перешивают    содержимое    путем    встряхивания    пробирки и помещают ее на водяную баню на 5 минут при температуре 370С, так как иммунная реакция с антигеном требует оптимальной температуры.   Как правило, агглютинация наступает в течение 3-5 мин.

  По истечении этого времени  для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают  (но взбалтывая!), 2—3 раза переворачивая пробирку.

 

Важно

В некоторых случаях не представляется возможным определение резус-принадлежности реципиента, тогда пользуются индивидуальной пробой на резус-совместимость крови донора и реципиента.

На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки крови больного и маленькую каплю переливаемой крови, их смешивают и ставят на водяную баню (42-45 °С) на 10 мин. Если наступила агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью реципиента и ее переливать нельзя.

Трактовка результатов. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом. При положительном резуль­тате агглютинация выражается в появлении хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости.

При отрицательном результате жидкость в пробирке остается равномерно окрашенной, без признаков агглю­тинации эритроцитов. Результат учитывают как истинный после проверки контрольных, образцов, т. е.

при поло­жительном результате со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью. 

 ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

 Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей  – носителей анти-D и анти-С гибридом. Цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с предназначены для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом.

Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение  трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек.

, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется, 

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов.

Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Совет

Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

Сохранить в соцсетях:

Источник: https://krasgmu.net/publ/6-1-0-11

Как определить группу крови — популярные методы

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

Зачем проводят исследование на группу крови?

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность. Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов.

Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Определение групп крови стандартными методами

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов.

При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций.

Ее результат — агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе — путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор.

После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256.

Обратите внимание

Использование других разведений может привести к появлению диагностической ошибки.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.

1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования).

После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

  • если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
  • если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке. На основании полученных результатов строится таблица или схема, которая визуально отображает результаты.

Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Важно

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Результаты исследования с применением сывороток и стандартных эритроцитов

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Цоликлоны – специфические антитела, полученные путем гибридизации их в живом организме (обычно, используются цоликлоны, полученные от мышей путем модификации В-лимфоцитов). Характерной их особенностью является развитие иммунной реакции между цоликлоном и антигеном А или В, расположенном на поверхности мембраны эритроцита.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Флаконы с различными цоликлонами

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном).

Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I.

Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Экспресс-методика “Эритротест”

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

  • универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
  • скарификатор для получения образца для исследования;
  • чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
  • стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

Процесс проведения анализа с использованием методики «Эритротест»

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D). В пятой лунке находится контрольный реагент, позволяющий предотвратить ошибки и правильно провести анализ на групповую принадлежность.

Совет

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.

Источник: https://redkrov.ru/group/kak-opredelit-gruppu-krovi.html

Методы определения группы крови

В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность.

Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.

Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции.

Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур.

Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.

Читайте также:  Что принимать при болях поджелудочной железы: таблетки, лекарства, пепсан

Состав крови различных групп крови

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

  • I (0) – ά, β — поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов;
  • II (А) – β — на поверхности имеется антиген А и антитело β;
  • III (В) – ά — поверхность содержит В с антителом типа ά;
  • IV (АВ) – 00 — поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Определение групп крови

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система — посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.

Разведение производится так:

  1. В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
  2. Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

  1. На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
  2. Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Правила расшифровки результатов

Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

  • Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы;
  • Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй;
  • При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III;
  • Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

Техника анализа перекрестным методом практически не имеет отличий от исследования с помощью сывороток, но присутствуют некоторые дополнения.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками   Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами  Группы крови
0(I) A(II) B(III) AB(IV) 0(I) A(II) B(III)
+ + 0(I)
+ + + A(II)
+ + + B(III)
+ + + AB(IV)

+ агглютинация;

– агглютинация отсутствует;

— реакцию не проводят.

Перекрестный метод получил распространение за счет того, что он предотвращает диагностические ошибки, возникающие при применении стандартных методик.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Цоликлоны

Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.

 Вид цоликлонов Группа крови
Результат агглютинации Анти-А Анти-В
0(I)
+ A(II)
+ B(III)
+ + AB(IV)

IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

  • Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0;
  • Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования;
  • Стеклянные палочки для перемешивания образцов;
  • Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Видео: Определения групп крови с помощью цоликлонов

Источник: https://moyakrov.info/blood/opredelenie-gruppy-krovi

Сестра

В основе определения групп крови лежит реакция агглютинации, то есть слипания. Комки образуются, если в пробе имеются одновременно агглютиноген А и агглютинин альфа или агглютиноген В и агглютинин бета или же и то, и то одновременно. Агглютиногены содержатся в эритроцитах, а агглютинины являются компонентами плазмы крови.

В соответствие с этими признаками выделяют четыре группы крови по системе АВ0:
— I (0) – не содержит агглютиногенов, только агглютинины;
— II (A) – агглютинин b, агглютиноген А;
— III (B) – агглютинин a, агглютиноген B;

— IV (AB) – содержит только агглютиногены.

Одним из методов установления группы крови является определение групп крови по стандартным сывороткам. Стандартные сыворотки содержат в себе заведомо известные агглютинины: групп I, II и III. Обратите внимание, на фотографию ниже, возможна она будет вам полезна для лучшего восприятия текста.

Протокол процедуры. Алгоритм.
Есть три сектора. Они могут быть в пределах одной тарелки, а могут быть специальными лунками. Секторы подписываются I, II и III, в каждый наносят соответствующую сыворотку.

У пациента выдавливают каплю крови, предварительно протерев палец спиртом.

Обратите внимание

И переносят по капле стеклянной палочки в сектора с сыворотками. Затем перемешивают кровь с сывороткой до розового цвета и засекают время. Реакция проходит в течение пяти минут. Необходимо помнить, что при работе с каждой следующей сывороткой палочка меняется, чтобы не допустить искажения результатов из-за смешения сывороток.

По прошествии указанного времени в лунки добавляют изотонический раствор NaCl и перемешивают.

Положительный результат реакции выглядит как красные зёрна, образованные слипшимися эритроцитами, при отрицательном — смесь сохраняет равномерную розовую окраску. Реакция протекает в течение 3-4 минут.

Анализ результатов
Дальнейшее определение групп крови – это элементарная комбинаторика. Если результат в трёх лунках отрицательный, то это группа 0, если прошла реакция только с II и I сыворотками, то группа A, только с I и III – B, а если с обеими – то AB.

Все прочие комбинации – являются артефактом и указывают на неверное проведение процедуры анализа.

У ошибок могут быть разные причины.

Самые частые это – использование слабых сывороток, у которых закончился срок годности; проведение анализа со слишком большой каплей крови пациента – она должна быть на порядок меньше, чем количество сыворотки, неспецифическая холодовая агглютинация при температуре среды, не соответствующей нормальной и слишком долгое время проведения реакции. Во время подсыхания на периферии смеси образуется зернистость, которая не должна учитываться при оценке группы крови.

Для наглядности, посмотрите это видео.

Источник: http://www.medcectre.ru/opredelenie-grupp-krovi-standartnymi-syvorotkami/

Определение резус фактора алгоритм

Определение резус-фактора со стандартной сывороткой анти-резус.

1Вступительное слово: Мы проводим определение группы крови со стандартной сывороткой анти-резус в процедурном кабинете по назначению врача. На мне шапочка, очки, маска, халат, фартук, перчатки. Руки предварительно обработаны гигиеническим способом.

2 Оснащение:

  1. Стандартная сыворотка анти-резус

  2. Стерильная пробирка

  3. Исследуемая кровь ( в пробирке)

  4. Физиологический раствор ( в пробирке)

  5. Стерильные пипетки 2 шт

  6. Ёмкость с 3% раствором хлорамина

3 Техника манипуляции:

  1. Внести пипеткой в пробирку две капли сыворотки анти-резус

  2. Внести отдельной пипеткой одну каплю крови

  3. Вращать между ладонями 5 мин

  4. Внести 1 каплю физраствора в случае если наблюдается агглютинация.

  5. Встряхнуть пробирку, наблюдать агглютинацию 5 мин.

  6. Форма ответа: при определении резус фактора со стандартной сывороткой анти-резус..

  1. Агглютинация не наблюдается – резус фактор отрицательный

  2. Агглютинация наблюдается – резус фактор положительный

  1. После проведения манипуляции все использованные предметы замачиваются в емкости с трехпроцентным раствором хлорамина.

Читайте также:  Стенозирующий атеросклероз: артерий нижних конечностей, лечение, сосудов головного мозга, магистральных

4 Возможные ошибки:

Грубые ошибки:

  1. Не использование средств защиты медработника.

  2. Нарушение пропорции сыворотки и крови 2:1

  3. Не соответствие картины агглютинации заключению о резус пренадлежности.

  4. Не продезинфицированы предметы контактировавшие с кровью

Не грубые ошибки:

  1. Время ожидания агглютинации менее 5 мин.

  2. Не внесен физраствор в случае наблюдаемой агглютинации.

  3. Выполнение манипуляции «на весу».

5 Критерии оценивания:

Сдал – отсутствие грубых ошибок, наличие не более двух не грубых ошибок.

Не сдал – наличие грубых ошибок, наличие более двух не грубых ошибок.

При совершении грубой ошибки преподаватель может попросить повторить соответствующий этап манипуляции. Если ошибка повторяется – не сдал. Допускается не более одного повторения.

StudFiles.ru

Определение резус фактора экспресс методом с помощью стандартного универсального реагента без подогрева в пробирке

Для определения резус-фактора может быть использована свежая не свернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед исследованием, или консервированная, без всякой предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после образования сгустка и отстаивания сыворотки.

Техника определения.

1мл стандартного универсального реагента (антирезусная сыворотка группы AB(IV)+33% раствор полиглюкина);

-1мл исследуемой крови(эритроцитов)

На дно пробирки внести 1 каплю стандартного универсального реагента и 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов).

Содержимое пробирки перемешать встряхиванием и затем медленно поворачивать, наклоняя пробирку почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по её стенкам. после 3-минутного покачивания ,

Важно

для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавить 2-3мл физиологического раствора хлористого натрия и перемешать, не взбалтывая, путём 2-3-х кратного перевёртывания пробирки. Оценку производить визуально.

Оценка результата.

Резус-(+) -наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветлённой жидкости .

Резус-(-) -отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость).

Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (цоликлон анти-d , анти-d супер).

Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде

Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.

Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом.

Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек.

Результаты реакции считывают через 3 мин.

Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

Метод агглютинации на чашках Петри.

– исследуемые эритроциты;

-две серии стандартных сывороток антирезус всех групп системы АВО;

-контрольные образцы резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов:

-водяная баня с постоянной температурой 46-48 С°

-чашки Петри

В чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева – одной серии, справа – другой в 3 ряда для 3 исследований. В каждую серию прибавляют по 1капле эритроцитов (1.исследуемые, 2.контрольные Rh-положительные и 3.

контрольные Rh-отрицательные). После смешивания (стеклянными палочками) сывороток в каждой точке с добавленными эритроцитами чашку помещают в водяную баню при t° 46—48° на 7—10 мин, после чего рассматривают в проходящем свете.

Совет

Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее – об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.

Метод агглютинации с 10% желатином:

Реакция конглютинации с желатиной обычно проводится в пробирках емкостью 8—10 мл. В штатив устанавливают 2 ряда пробирок для двух различных серий стандартной сыворотки.

В контрольные пробирки каждого ряда вводят по 1 капле стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов, в остальные пары пробирок — исследуемые эритроциты.

Исследование можно проводить как с отмытыми, так и с неотмытыми эритроцитами.

Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле подогретой до разжижения желатины (10% раствор) и по одной капле стандартной сыворотки.

Содержимое пробирок смешивают путем встряхивания и помещают в водяную баню при t° 46—48° на 5 мин.

, по истечении которых в каждую пробирку доливают 5—8 мл подогретого до t° 46—48° физиологического раствора NaCl и рассматривают на свет, определяя наличие или отсутствие агглютинации (рис. 2).

Метод агглютинации в солевой среде.

При исследовании сывороткой, содержащей полные антитела, применяют метод агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках (высотой 2—2,5 см, диаметром 0,5 — 0,6 см).

В штатив устанавливают 2 ряда пробирок (по количеству исследуемых образцов и по 2 для контроля), в которые вводится по 2 капли стандартной сыворотки и по 1 капле 2% взвеси эритроцитов, предварительно дважды отмытых физиологическим раствором NaCl.

Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час.

О резус-принадлежности судят по форме осадка, который рассматривают через лупу с 5—7-кратным увеличением над источником света, закрытым матовым стеклом. Результаты учитывают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации в исследуемых эритроцитах после проверки контрольных образцов.

studopedia.ru

Техника постановки пробы на резус совместимость с полиглюкином

Цель:определить совместимость донорской крови с кровью реципиента по резус принадлежности.

Показания:гемотрансфузия.

Приготовить:донорская кровь, 33% раствора полиглюкина, сыворотка крови реципиента, стеклянные палочки, пипетки, чашка Петри, шприц, игла, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы, водяная баня.

Алгоритм действия:

  1. На дно пробирки внести 2 капли сыворотки больного, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% полиглюкина;
  2. Встряхнуть пробирку;
  3. Пробирку наклонить почти горизонтально и медленно поворачивать вокруг оси в течении 5 минут;
  4. Долить в пробирку 3-4 мл изотонического раствора хлорида натрия;
  5. Перемешать путем 2-3 кратного переворачивания пробирки ( не взбалтывать!);
  6. Посмотреть на свет и оценить результат;
  7. Если есть реакция агглютинации на фоне просветленной жидкости, то кровь переливать нельзя!;
  8. Если агглютинации не произошла, то реакция отрицательная и кровь переливать можно.

Примечание: температура воздуха должна быть в пределах 15- 25о С для профилактики ложной агглютинации.

Техника постановки биологической пробы

Цель: для определения совместимости крови донора и реципиента.

Показания:гемотрансфузия.

Приготовить:донорская кровь, систему для переливания крови, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки.

Алгоритм действия:

  1. Перелить струйно 10-15 мл крови или кровезаменителей внутривенно;
  2. Закрыть систему на 3 минуты;
  3. Оценить состояние пациента;
  4. Перелить струйно 10-15 мл крови или кровезаменителей внутривенно;
  5. Закрыть систему на 3 минуты;
  6. Оценить состояние пациента;
  7. Перелить струйно 10-15 мл крови или кровезаменителей внутривенно;
  8. Оценить состояние пациента.

Примечание:При появлении болей в животе, груди, пояснице, рвоте, головной боли, одышке, тахикардии, сыпи на коже – кровь или кровезаменители вводить нельзя!

studopedia.ru

34. Оказание помощи врачу при наложении лейкопластырного скелетного вытяжения и вытяжения с помощью петли Глиссона

  1. Уложить пациента на горизонтальную поверхность кровати с системой блоков и грузом в изголовье

  1. Закрепить петлю Глиссона на голове либо из лейкопластыря сформировать петлю в основании черепа так, чтобы она фиксировалась у основания черепа (под подбородком и под большими затылочными буграми)

  1. Прикрепить груз весом 6 кг (вес груза зависит от вида повреждения и определяется врачом)

35. Применение эластичных бинтов и чулок на нижние конечности

Эластичный бинт

  1. Накладывать утром для предупреждения кровенаполнения и растяжения вен

  2. Придать ноге возвышенное положение под углом 45 град.

  3. Первые туры сделать у основания пальцев

  4. Далее по спирали бинтовать до паховой складки

  5. Туры должны оказывать умеренное давление на мягкие ткани; не должны вызывать неприятные ощущения; пальцы на стопе должны быть розовыми

36. Применение съемного бандажа, корсета

  1. Предназначением бандажа, корсета является фиксация части туловища в функциональном состоянии, предупреждение осложнений, связанных с анатомическими дефектами тела, приводящими в отсутствии бандажа или корсета к более грубым анатомическим и функциональным расстройствам

  1. Бандаж (корсет) должен содержаться в чистоте

  1. Пациент должен принять горизонтальное положение перед надеванием бандажа (корсета)

  1. При надевании не защемлять кожу; не допускать болезненных ощущений

Пуговицы и петли должны располагаться на лицевой стороне бандажа; лямки не должны «впиваться» в мягкие ткани.

  1. Пребывание в бандаже (корсете) не должно приводить к нарушениям дыхания и сердечной деятельности

37. Выявление признаков непригодности крови к переливанию, транспортирование крови из отделения переливания крови

  1. Непригодная кровь к переливанию, если:

– нарушены сроки и условия хранения крови

– флакон с кровью не имеет герметичности

– верхний слой во флаконе с кровью розовый (гемолиз эритроцитов)

– имеются капли жира, пленки, сгустки

– нечеткая граница между слоями крови во флаконе

  1. Хранится кровь в холодильнике при температуре 4 град; транспортировка в специальных контейнерах, нивелирующих изменяющийся температурный режим окружающей среды

38. Составление наборов и определение групповой принадлежности и резус-фактора крови

Определение группы крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В

  1. Приготовить тарелку, цоликлоны, стеклянные палочки, часы, исследуемую кровь

  1. Разделить тарелку полосой фломастера на 2 части

  1. Нанести на тарелку по одной капле цоликлона анти-А и анти-В

  1. Нанести на тарелку по одной капле крови (рядом с каплей цоликлона), каждая из которых в 10 раз меньше капли цоликлона

  1. Разными концами стеклянных палочек перемешать

  1. Покачивать в течение 2,5 минут

  1. Читать результаты реакции:

агглютинации нет – 1 группа крови

агглютинация в анти-А – 2 группа крови

агглютинация в анти-В – 3 группа крови

агглютинация в обеих каплях – 4 группа крови

Определение резус-фактора

  1. Приготовить пробирки, пипетки, физраствор (раствор хлорида натрия 0,9 %), универсальный реагент-антирезус, исследуемую кровь

  1. Нанести на стенку пробирки каплю универсального реагента-антирезуса и каплю крови, равных по размеру

  1. Добавить 3 мл. физраствора

  1. Перевернуть, не встряхивая

  1. Читать результаты реакции:

Наличие агглютинации – исследуемая кровь резус-положительная

Отсутствие агглютинации – исследуемая кровь резус-отрицательная

StudFiles.ru

Читайте также

Источник: http://zna4enie.ru/opredelenie/opredelenie-rezus-faktora-algoritm.html

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector